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干貨:關于酶活檢測那些事(五)

分光光度計和酶標儀的區別?

分光光度計和酶標儀都是實驗室常用的分析測量工具,它們的測定原理相同,都是利用朗伯-比耳定律,測定樣本的吸光度。

分光光度計,又稱光譜儀,是將成分復雜的光分解為光譜線的科學儀器。測量范圍一般包括波長范圍為380-780 nm的可見光區和波長范圍為200-380 nm的紫外光區。不同的光源都有其特有的發射光譜,因此可采用不同的發光體作為儀器的光源。

酶標儀即酶聯免疫檢測儀。是酶聯免疫吸附試驗的儀器又稱微孔板檢測器。可簡單地分為半自動和全自動2大類,其工作原理基本一致,其核心都是一個比色計,即用比色法來進行分析。 一般測試液的終體積在250μL以下,可以用酶標儀。

 

雖然分光光度計和酶標儀都是測定吸光度的儀器,但是他們還存在四大區別,了解這四大區別,可以指導我們更容易的完成檢測實驗。

1、比色容器

分光光度計用的是比色皿,通常是塑料(聚苯乙烯或異丁烯酸酯)、玻璃和石英材質,每個比色皿一次只能盛裝一種溶液。

酶標儀用的是酶標板(塑料微孔板)。常用透明的聚苯乙烯材料制成,聚苯乙烯可以作為固相載體,對抗原、抗體或抗原抗體復合物的有較強的吸附作用。酶標板通常為48孔或96孔,每個微孔可以盛裝不同的溶液。

2、光路方向

分光光度計是水平光路,而酶標儀是垂直光路。由于酶標板是多排多孔的,光線只能垂直穿過,因此酶標儀的光束都是垂直通過待測溶液和酶標板的,光束既可是從上到下,也可以是從下到上。垂直光的優點是標本吸光度受液體濃縮或稀釋的影響小,缺點是受被測樣本液面是否水平、酶標板透光性、孔底是否平整等影響較大。

3、光路長度

光密度(OD值)與吸光系數、待測組分的濃度以及光路長度成正比。所以光路長度能直接影響OD值。

分光光度計采用的比色皿的寬度通常是1cm,所以光路長度固定為1cm。只要在比色皿中加入足夠的待測溶液,其OD值不變。比如,待測溶液有5mL,無論在比色皿中加入2.5mL還是3mL,測出的OD一樣。

酶標儀采用的是垂直光路, 光路的長度是液體液面的高度,所以測得的OD值受到樣品的體積的影響。比如,待測溶液有1mL,在酶標板上加入150uL和200uL,測出的OD值不同。因此,在酶標板上加樣一定要操作規范,加樣偏差對結果影響比較大。

4、通道數

儀器的通道數直接影響實驗效率。分光光度計通常是單通道,一次只能測定一個樣本,大量樣本的測定需要時間很長,實驗效率比較低。酶標儀通常是8通道或12通道,一次可以同時測定8個或12個樣本,大量樣本的測定需要時間短,實驗效率比較高。

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